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의생명학적 시험분석서비스

세포독성 시험

YEONJIN 2020-04-16 04:32:39 114

세포독성 (Cytotoxicity, 細胞毒性)시험이란.

 

in vitro 상에서 세포에 독성이 없는 시료의 농도를 확인하는 시험이다.
세포독성(cytotoxicity, 細胞毒性)은 세포에 대한 독성이다.
연속희석(serial dilution)
한 시료를 처리한 세포를 일정 시간 배양 했을 때 세포 생존율에 영향을 주지 않는 최대 농도를 찾기 위한 시험법이다.
방사선 또는 화학물질, 혹은 다른 생물체, 생체물질 등이 세포에 상해(傷害[장해(障害)])를 입히는 경우와 같은 특성을 말한다.
독성 작용제로는 이를테면 화학 물질, 면역 세포, 일부 종류의 베놈(venom, 뱀 등의 독성)을 들 수 있다.

 

세포(細胞)는 지구상 대다수 유기체의 기본 구조 및 활동 단위이다.
박테리아(Bacteria) 등의 유기체는 단지 세포 하나로 이루어진 단세포 생물(單細胞生物)이다.
반면 인간을 포함한 다른 유기체는 다세포이며, 인간의 경우 대략 60조 개 이상의 세포로 구성되어 있다.

세포의 영어 낱말 cell(셀)은 작은 방을 의미하는 라틴어의 “켈라(cella)”에서 유래하였다.
각 세포는 적어도 그 자체로 완전하고 스스로 활동 가능하다.
즉 영양소를 받아들여서 에너지로 전환하고, 고유한 기능을 수행하며 필요에 의해 번식할 수도 있는 것이다.

 

세포독성시험은 인체유래정상폐세포주인 MRC-5 또는 WI-38 으로 수행하고 세포주에 시료처리 후 세포 사멸 정도를 판단한다.

 

한국분석시험연구원은 국립환경과학원 독성평가를 위한 생체지표 연구에서 제시하는 방법론에 의하며 Cell viability assay, MTT assay, LDH leakage assay, Neutral red assay 시험이 있다.

 

Test method

Cell viability assay : in vitro 상에서 세포 생존을 확인
– 연속희석(serial dilution)한 시료를 처리한 세포를 일정 시간 배양한 뒤 세포 내 기관인 미토콘드리아(mitochondria)가 가지고 있는 탈수소효소와 반응하는 시약인 EZ-CYTOX를 이용하여 색 변화 정도를 측정, 세포 생존율을 알아보는 시험법.
– 결과(단위) : cell viability(%)

 

MTT assay : in vitro 상에서 세포 생존을 확인
– 연속희석(serial dilution)한 시료를 처리한 세포를 일정 시간 배양한 뒤 세포 내 기관인 미토콘드리아(mitochondria)가 가지고 있는 탈수소효소와 반응하는 시약인 MTT를 이용하여 색 변화 정도를 측정, 세포 생존율을 알아보는 시험법.
– 결과(단위) : cell viability(%)

 

LDH leakage assay : in vitro 상에서 cell supernatant  내 LDH 활성을 측정하여 간접적으로 세포 생존율을 확인



– 연속희석(serial dilution)한 시료를 처리한 세포를 일정 시간 배양한 뒤 cell supernatant에 있는 LDH가특정 효소의 촉매에 의해 형성하는 색 변화 정도를 측정하여 생존율을 알아보는 시험법.
– 결과(단위) : cell viability(%)

 

Neutral red assay : in vitro 상에서 cell에 축적시킨 neutral dye의 용출을 측정하여 간접적으로 세포 생존율을 확인
– 연속희석(serial dilution)한 시료를 처리한 세포를 일정 시간 배양한 뒤 상해를 입지 않은 세포의 리소좀에 흡수되어 축적되는 특징을 가진 neutral red dye의 양을 측정하여 세포 생존율을 알아보는 시험법.
– 결과(단위) : cell viability(%)

 

시료 타입

액상, 파우더 및 고체(ISO 10993-5:2009)

 

소요기간

3/4주